熒光定量PCR檢測的是起點熒光值，定量分析的是未經(jīng)PCR放大之前的起始模板量。

這就涉及到熒光定量PCR的第2個關(guān)鍵點——定量方式的選擇：相對定量和絕dui定量。

絕dui定量可測定目的基因在樣本中的具體拷貝數(shù)，相對定量測定的是目的基因在兩個或多個樣本中的相對表達水平，定量方式的選擇取決于實驗?zāi)康摹?

標準品的要求：

（1）標準品與待測樣本用相同的引物進行擴增，確保引物在兩者中擴增效率相同。

（2）標準品來源可以是基因組DNA，質(zhì)粒DNA，純化的PCR產(chǎn)物，Total RNA（cDNA），體外轉(zhuǎn)錄的 RNA等，其中基因組DNA和Total RNA（cDNA）不能直接用作標準品。

（3）標準品必須經(jīng)過準確定量，其拷貝數(shù)必須已知。

（4）標準品與待測樣本要在同一次實驗以及相同的條件下完成，擴增效率盡量接近。

標準曲線的制作:

將標準品稀釋5~6個濃度梯度，稀釋倍數(shù)可以選擇5倍（cDNA）或10倍（質(zhì)粒DNA、體外轉(zhuǎn)錄RNA）。