產(chǎn)品描述產(chǎn)品
在基因重組實(shí)驗(yàn)中，常使用感受態(tài)細(xì)胞攝取外源DNA以制備基因文庫(kù)、重組質(zhì)粒以及進(jìn)行亞克隆等。
本品是經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。經(jīng)使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，本品轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg，廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。本品適用于藍(lán)白斑篩選，另對(duì)recA1和endA1進(jìn)行特定的改造使其更能保證克隆DNA的穩(wěn)定性以及更有利于高純度質(zhì)粒DNA的提取。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
JM109感受態(tài)細(xì)胞基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 e14-(mcrA-) supE44 relA1 △(lac-proAB)/F’ [traD36 proAB+lac Iq lacZ △M15]。
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸。
JM109感受態(tài)細(xì)胞-80℃保存，pUC19質(zhì)粒-20℃保存。有效期半年。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
注意事項(xiàng)
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2）整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。
3）為確保*高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫，避免移液槍吹吸。
JM109 Chemically Competent Cell JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞4）為防止轉(zhuǎn)化不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，*低化實(shí)驗(yàn)可能遇到的風(fēng)險(xiǎn)。
使用方法
1）取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2）向100 μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入2-10μl目的DNA或連接產(chǎn)物，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置20min。
3）將離心管置于42℃水浴中放置90s，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2min，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4）向離心管中加入500μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含***），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)60min（200 rpm）， 目的是促使菌體復(fù)蘇，抗性基因表達(dá)。
5）將離心管內(nèi)容物混勻，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)***的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 h。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
