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組化幾種溶液的配制方法

發(fā)布時間:2016-11-09

1、PBS: 
取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸餾水中,混勻,測pH值應(yīng)在7.2~7.4之間,若偏離此范圍,請用0.1N的HCL或NaOH調(diào)整。

2、TBS: 
2.1 Tris緩沖液配方:(0.5 M  pH7.6)


Tris(三羥甲基氨基甲烷)
60.57g
1N HCL 約420ml
雙蒸水 加至1000ml

Tris緩沖液配制方法: 
    先以少量雙蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用HCl(1N)或NaOH(1N)將pH調(diào)至7.6,*后雙蒸水加至1000ml。此液為儲備液,4℃冰箱中保存。 
2.2 TBS配方:


Tris-HCI緩沖液(0.5M pH7.6)
100ml
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
雙蒸水 加至1000ml

TBS配制方法: 
先以少量雙蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl緩沖液,*后加雙蒸水至1000ml,充分搖勻。

3、枸櫞酸鹽緩沖液(Citrate buffer): 
3.1 儲存液: 
A. 0.1M枸櫞酸溶液:稱取21.01g枸櫞酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸餾水中。 
B. 0.1M枸櫞酸鈉溶液:稱取29.41g枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸餾水中。 
3.2 工作液: 
取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸餾水中,溶液pH值應(yīng)為6.0±0.1

4、胰酶(Trypsin): 
4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液: 
常用濃度為0.125%,即使用前將一滴試劑1胰酶溶液和三滴試劑2胰酶稀釋液均勻混合(1:3稀釋),則可直接滴加使用。胰酶的*終濃度可以根據(jù)使用者的要求進行調(diào)整,濃度范圍可以從0.05%(1:10稀釋)至0.25%(1:1稀釋)。 
4.2 ZLI-9010胰蛋白酶: 
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的無水氯化鈣水溶液中,溶解即可。 
5、胃酶(Pepsin): 
4%胃蛋白酶,用0.1mol/L HCL配制。

6、DAB: 
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit: 
使用前只需將試劑盒提供的A、B、C三種試劑各一滴加至1ml雙蒸水中,即可獲得1ml DAB工作液,簡單易用。 
6.1 ZLI-9030 DAB: 
6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入0.1ml濃度為3%的H2O2,過濾掉沉淀物,即可。

7、AEC: 
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml濃度為0.1M的醋酸緩沖液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,過濾掉沉淀物。

8、RIPA: 
1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液體可長期保存)。以下抑制劑以儲存液方式保存,臨用前加入RIPA中。 
8.1 10mg/ml PMSF異丙醇溶液(用量為l/mlm10) 
8.2 Aprotinin(Sigma產(chǎn)品,用量為l/mlm30) 
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷凍液 
(用量為l/mlm10)

9、Blotto A: 
常規(guī)使用1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。

10、Blotto B:

與Phosphotyrosine抗體共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分實驗中milk可完全去除,但可能引起背景增高。

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