斑馬魚(yú)皮膚損傷模型的建立及分子機(jī)制
陳錫強(qiáng) 王榮春 王希敏 劉可春 蕭崇德 韓利文 侯海榮
齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院)山東省科學(xué)院生物研究所山東省科學(xué)院**篩選技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東省生物檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室山東省生物傳感器重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中原大學(xué)生物科技系表皮干細(xì)胞研究室
摘要：目的以皮膚熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)（ktr4:NTR-h Kik GR）為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,研究長(zhǎng)春新堿對(duì)皮膚細(xì)胞的損傷作用及其分子機(jī)制,建立皮膚損傷模型。方法取受精后24 h皮膚熒光斑馬魚(yú)胚胎,將脫膜后的胚胎分別置于0.010.04 mmol·L-1不同濃度的長(zhǎng)春新堿中,24 h后采用熒光顯像的方法對(duì)斑馬魚(yú)皮膚熒光斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)處理;同時(shí)對(duì)魚(yú)體細(xì)胞死亡情況進(jìn)行TUNEL試劑盒檢測(cè),確定其皮膚細(xì)胞死亡的水平;利用蛋白**印跡的方法對(duì)各組斑馬魚(yú)胚胎的caspase-3、KRT4及p53表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在長(zhǎng)春新堿與斑馬魚(yú)胚胎共同孵育24 h后,0.02、0.04 mmol·L-1長(zhǎng)春新堿明顯引起斑馬魚(yú)熒光皮膚細(xì)胞減少（P<0.01）;TUNEL檢測(cè)表明,長(zhǎng)春新堿與對(duì)照組比較能明顯引起斑馬魚(yú)皮膚細(xì)胞凋亡;Western bolt分析顯示,0.02、0.04 mmol·L-1長(zhǎng)春新堿能誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎caspase-3和p53表達(dá)增加（P<0.01）,同時(shí)高濃度的長(zhǎng)春新堿可使皮膚角蛋白KRT4表達(dá)明顯減少（P<0.01）。結(jié)論利用長(zhǎng)春新堿引起斑馬魚(yú)皮膚損傷,該局部毒性作用可作為皮膚損傷的造模新方法。 還原
基金：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81202584)； 山東省重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目(No 2016GSF121005)；
關(guān)鍵詞：長(zhǎng)春新堿; 斑馬魚(yú); 細(xì)胞凋亡; caspase-3; p53; KRT4;
分類(lèi)號(hào)：R-332;R96
