FITC PE APC**熒光共染

從理論上來說，**熒光三染（特指不要求Dapi的那種），一般選擇 紅 綠 藍(lán)三種顏色，比較容易區(qū)分。首先說明的是，熒光在機(jī)器上的原始顏色其實(shí)并不重要，顏色只是肉眼觀察到的顏色，實(shí)際上*后的信號(hào)是通過機(jī)器檢測(cè)相應(yīng)熒光染料被激發(fā)后的發(fā)射光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度而產(chǎn)生的，那么這也就是說明重要的是你的激發(fā)光和發(fā)射光之間的區(qū)間能否區(qū)別開，而實(shí)際上熒光染料本身發(fā)射出來的顏色*后并不重要，通過軟件每種染料的顏色我們都可以調(diào)成任意其他顏色，比如你的Fitc 默認(rèn)是綠色，但是如果你想要紅色，直接更換顏色就可以了，（我用的是leica的機(jī)器），理論上來說olympus 的機(jī)器也是一樣的。再就是你的這個(gè)體系中APC 由于激發(fā)和發(fā)射光的區(qū)間都在600以后，和你的Fitc 和 PE不然不沖突。而PE的發(fā)射區(qū)光波長(zhǎng)區(qū)間和FITC的也離得很遠(yuǎn)，所以不太沖突。難辦的是，F(xiàn)itc 吸收光峰值在488，而PE的吸收峰區(qū)間在 490-560，這也就導(dǎo)致你直接選擇PE模式去激發(fā)熒光，必然會(huì)激發(fā)Fitc，從而產(chǎn)生重疊的熒光信號(hào)，使得*后結(jié)果特異性（就是能否區(qū)分的特性）較差，但是PE的吸收波長(zhǎng)區(qū)間很大，建議可調(diào)高PE的吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)度，從而較好的在激發(fā)PE的時(shí)候而不會(huì)激發(fā)Fitc 從而顯著提高。綜上所述你的三染模型理論上是可以行的通的，F(xiàn)itc 選擇 488 激光管激發(fā)，PE選擇543激光管激發(fā)，而APC選擇633 激光管激發(fā)即可，至于顏色可以選擇綠，紅，藍(lán)，或者綠，紅，紫色(或者灰白色)，至于藍(lán)色可以用來染色DAPI。

我還是覺得采用激光共聚焦的順序掃描應(yīng)該可以完全解決串色干擾的問題。至于顏色，可以自己調(diào)節(jié)。

如果你的共聚焦顯微鏡的熒光染料庫(kù)里沒有你所用給的染料，簡(jiǎn)單的辦法就是選擇跟你的染料的*接近的染料，而不是隨便就選擇一個(gè)。

如果共聚焦顯微鏡的配置有光譜拆分的話，就更不用擔(dān)心干擾的問題，因?yàn)檫@個(gè)拆分可以把發(fā)射光譜非常接近的熒光也可以被清楚分離。

如果還解決不了問題的話，可以(推薦使用）直接跟共聚焦的廠家的工程師聯(lián)系（官網(wǎng)上肯定有聯(lián)系方式的），他們會(huì)很樂意幫助你的餓，而且可以很快的解決問題。

ps：你的共聚焦是什么牌子和型號(hào)的??？