ELISA試劑盒實驗當(dāng)中給出的總結(jié)經(jīng)驗
ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是不是降解，這聯(lián)絡(luò)到你做出的抗體可不可以被其辨認，所以保管抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴峻警告我必定要在冰浴下緩慢消融便是這個道理。還有有的包被原可以不是蛋白，關(guān)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事前對其改造再加以包被，列出如下:
①親和素生物素:先親和素先包被載體，參與生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、健壯，已擴展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后參與ELISA板孔中，開蓋置冰箱或冷風(fēng)吹干，待酒精蒸騰后，讓脂質(zhì)天然干固在固相表面。
③小分子有必要依托和大的蛋白載體偶聯(lián)后才華固定在固相載體上。
包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需求，包被原的特殊性也可以選用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)留意以下原理：ELISA試劑盒由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡(luò)的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附對錯特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般富含更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有穩(wěn)固的理論外也要實習(xí)，看一下結(jié)束可不可以應(yīng)用到自個試驗當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
ELISA試劑盒封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的進程。封閉便是讓許多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空位，然后架空ELISA后的過程中煩擾物質(zhì)的再吸附。常有：0.05%-0.5%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，對比價廉，可以高濃度運用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動物血清（首要為了掃除相似蛋白煩擾）和酪蛋白等等。但結(jié)束選用啥，要根據(jù)試驗具體來實習(xí)。
