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石蠟切片做**熒光,分享

發(fā)布時(shí)間:2017-06-21

石蠟切片做**熒光,分享

1,烤片,在恒溫箱中58攝氏度20分鐘。

2,脫蠟和水化。

三桶二甲苯,分別浸泡15分鐘。

100,95,85,70四桶酒精,分別浸泡5分鐘。

然后在水龍頭下,流水沖洗10min。

3,修復(fù),我是用的檸檬酸緩沖液ph6的,高壓修復(fù),高壓鍋噴氣后3分鐘。然后取出來(lái)自然降溫(我是浸泡在冷水中)。用PBS洗10min,三次。

4,甩干液體,用**組化筆畫圈。

5,0.2%的Triton破膜(我染的核蛋白),15min。

6,3%雙氧水阻斷,30min,然后PBS洗10min,三次。

7,5%BSA封閉1小時(shí)。

8,甩干液體,用1%BSA配一抗。室溫30min。然后4度冰箱過(guò)夜。

9,**天取出,室溫30min,PBS洗15min,三次。

10,甩干液體,避光加稀釋的二抗,孵育1小時(shí),避光PBS洗15min,三次。

11,用DAPI染核,PBS洗。

12,加防粹滅劑,封片。

在熒光顯微鏡下看。


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