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原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法

發(fā)布時(shí)間:2016-12-06
  原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。原代細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中,也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細(xì)胞株,傳代次數(shù)越多,就越有可能變成細(xì)胞株(基因缺陷型),因此科學(xué)界也通常把**代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。 
  原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)步驟為: 
  1)將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出并**除去存留在組織上的**、病毒、**等污染源,這些污染源將會(huì)所需培養(yǎng)的原代細(xì)胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡,因此整個(gè)原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中**在無菌狀態(tài)下進(jìn)行。
  2)將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘,通常在37C水浴里進(jìn)行,而蛋白酶的選定取決于器官組織和所需細(xì)胞的類型,比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能分解而出單個(gè)細(xì)胞,但是對(duì)于腦組織和乳腺等軟組織,就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶, 以免損傷分散出來的單個(gè)細(xì)胞。
  3)將分散而成的單個(gè)細(xì)胞置于合適的培養(yǎng)基(含有特殊細(xì)胞生長因子、添加劑以及血清, 或者無血清培養(yǎng)基)中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖, 整個(gè)過程都是在無菌情況下操作。


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