細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
發(fā)布時(shí)間：2016-03-24
1） 細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代
培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和***的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)細(xì)胞因子依賴細(xì)胞株還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～4天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，1：3或1：5稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
帖壁生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌細(xì)胞一次，加入消化液，在37℃中消化約3～10分鐘，待細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí)，倒去消化液，加入新鮮培養(yǎng)液，懸浮和吹打分散細(xì)胞。也可以待細(xì)胞完全消化脫落，500×g離心5分鐘，去除消化液，用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞。1：3或1：5稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
2）細(xì)胞株的凍存：
1．取培養(yǎng)2～3天生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2×106～2×107/ml。
2．在1ml細(xì)胞凍存管中加入0.5ml細(xì)胞懸液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜（或甘油），混勻后密封。置4℃1小時(shí)，－20℃2小時(shí)，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過(guò)夜后浸入液氮中。
3）細(xì)胞株的復(fù)蘇：
復(fù)蘇時(shí)，從液氮中取出凍存管，立即置37℃水浴中融化細(xì)胞。將細(xì)胞直接加入10ml含15％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置37℃5％CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞待細(xì)胞全部沉降后小心吸去上清液，更換新鮮的上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)；帖壁細(xì)胞則培養(yǎng)2～ lang=EN-US>3小時(shí)，待細(xì)胞帖壁后，倒去培養(yǎng)液，更換新鮮的上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。也可以在加入新鮮培養(yǎng)液以后，500×g離心5分鐘，去上清液，加入新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
