酵母菌落直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)化法

1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉(zhuǎn)移到1.5ml的無菌離心管中。

2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉(zhuǎn)化DNA是用未經(jīng)RNA酶處理的“mini－prepDNA”方法制得，則不需加載體DNA）。

3．加0.5mlPLATE溶液，振蕩。

PLATE溶液：

40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；SigmaP3640）

0.1mol/L醋酸鋰

10mmol/LTris-HCl（pH7.5）

1mmol/LEDTA

4．置于實驗臺上，室溫培養(yǎng)4天。

5．置42℃下熱激15分鐘。

6．以8000～10000r/min離心10秒沉淀細胞，小心棄去上清液，將細胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水，使細胞懸浮均勻，再直接將混合液涂選擇平板。