SCI論文翻譯-RT-PCR實驗服務
實驗外包-RT-PCR實驗服務
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RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆轉錄PCR，是將RNA的逆轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增反應（PCR）相結合的技術。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞組織中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。
引物選擇
隨機引物
適用于長的或具有發(fā)卡結構的RNA。適用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反轉錄反應。主要用于單一模板的RT-PCR反應。
Oligo dT
適用于具有PolyA尾巴的RNA。（原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。）由于Oligo dT要結合到PolyA 尾巴上，所以對RNA樣品的質量要求較高，即使有少量降解也會使全長cDNA合成量大大減少。
基因特異性引物
與模板序列互補的引物，適用于目的序列已知的情況。天為時 性引物 代公司的SuperScript One-Step System特別適合于與基因特異性引物連用。
影響因素
RT-PCR反應受多個因素影響，如硫酸鎂的濃度, 引物退火的溫度，擴增的循環(huán)數(shù)等。
◇建議選擇0.5-3.0 mM (相差0.5 mM)的硫酸鎂作初步實驗。
◇對于具有較高Tm的引物，增加退火和延伸時的溫度對反應有利。較高的溫度有利于減少非特異的引物結合，因而提高特異產物的得率。
◇大多數(shù)目標RNA經40輪PCR反應就能觀察到。但如果目標RNA太**，或者只有很少的起始材料，有必要增加擴增的次數(shù)到45-50次。
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