SCI論文翻譯-RT-PCR/熒光定量PCR結(jié)果分析
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real time pcr結(jié)果分析
Delta Cq ，Cq mean都是在設(shè)置的時候必須做的，哪幾個孔是重復(fù)的，然后機(jī)器就會算。是看你的加樣誤差。
分析的時候只看一個，就是Ct (Cq) 值。先把內(nèi)參的Cq值的平均數(shù)相減（假設(shè)你同一個樣本一次做了3個孔，就取3個孔的平均數(shù)），算出加樣的差別。然后再把目標(biāo)基因的Cq值相減，算出差別，再除以內(nèi)參的差別，就得到目的基因的差別倍數(shù)。
統(tǒng)計學(xué)分析要等到你重復(fù)至少3次以上完全獨立的試驗，再做PCR后算出差異倍數(shù)，才能做。不然統(tǒng)計的是你的加樣誤差和機(jī)器的分析誤差，沒有任何意義。
熒光定量PCR結(jié)果分析
如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下：
對照組基因A的CT值為20， 內(nèi)參（比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18，內(nèi)參CT值14。
首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因A的量在實驗組是對照組的4倍。但是由于加樣量是2倍，所以4處以2=2，*后的相對量是2倍。
幾點注意：
1。必須確定擴(kuò)增的特異性
2。 只有相同目標(biāo)的CT值才能相減（擴(kuò)增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理論值，實際擴(kuò)增效率低于2。
4。 *好不用Syber Green
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