實驗外包- siRNA原理服務(wù)

Small interfering RNA (siRNA)：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發(fā)與之互補的目標(biāo)mRNA的沉默。

實驗外包- siRNA原理

RNA干涉（RNAi）在實驗室中是一種強(qiáng)大的實驗工具，利用具有同源性的雙鏈RNA（dsRNA）誘導(dǎo)序列特異的目標(biāo)基因的沉寂，迅速阻斷基因活性。siRNA在RNA沉默通路中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進(jìn)行降解的指導(dǎo)要素。siRNA是RNAi途徑中的中間產(chǎn)物，是RNAi發(fā)揮效應(yīng)所必需的因子。siRNA的形成主要由Dicer和Rde-1調(diào)控完成。由于RNA 病毒入侵、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄、基因組中反向重復(fù)序列轉(zhuǎn)錄等原因,細(xì)胞中出現(xiàn)了dsRNA，Rde-1(RNAi缺陷基因-1)編碼的蛋白質(zhì)識別外源dsRNA，當(dāng)dsRNA達(dá)到一定量的時候，Rde-1引導(dǎo)dsRNA與Rde-1編碼的Dicer（Dicer是一種RNaseIII 活性核酸內(nèi)切酶，具有四個結(jié)構(gòu)域：Argonaute家族的PAZ結(jié)構(gòu)域，III型RNA酶活性區(qū)域，dsRNA結(jié)合區(qū)域以及DEAH/DEXHRNA解旋酶活性區(qū)）結(jié)合，形成酶-dsRNA復(fù)合體。Dicer 切割后形成siRNA，然后，在ATP的參與下，細(xì)胞中存在的一種RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體RNA-induced silencing complex RNAi干涉的關(guān)鍵步驟是組裝RISC和合成介導(dǎo)特異性反應(yīng)的siRNA蛋白。siRNA并入RISC中，然后與靶標(biāo)基因編碼區(qū)或UTR區(qū)完全配對，降解靶標(biāo)基因，因此說siRNA只降解與其序列互補配對的mRNA。其調(diào)控的機(jī)制是通過互補配對而沉默相應(yīng)靶位基因的表達(dá)，所以是一種典型的負(fù)調(diào)控機(jī)制。siRNA識別靶序列是有高度特異性的，因為降解首先在相對于siRNA來說的中央位置發(fā)生，所以這些中央的堿基位點就顯得極為重要，一旦發(fā)生錯配就會嚴(yán)重抑制RNAi的效應(yīng)。

特點

siRNA有如下特點：

1. 長度約在22nt左右。

2. 依賴Dicer酶的加工，是Dicer的產(chǎn)物，所以具有Dicer產(chǎn)物的特點。

3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。

4. 是RISC組分。

5. siRNA合成是由雙鏈的RNA或RNA前體形成的。

6. siRNA一般是人工體外合成的，通過轉(zhuǎn)染進(jìn)入人體內(nèi)，是RNA干涉的中間產(chǎn)物；植物體內(nèi)也存在內(nèi)源的siRNA。

7. 結(jié)構(gòu)上， siRNA是雙鏈RNA。

8. 在Dicer酶的加工過程中， siRNA對稱地來源于雙鏈RNA的前體的兩側(cè)臂。

9. 在作用位置上， siRNA可作用于mRNA的任何部位，并與mRNA完全互補。

10. 在作用方式上， siRNA只能導(dǎo)致靶標(biāo)基因的降解，即為轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控。

11. siRNA不參與生物生長，是RNAi的產(chǎn)物，原始作用是抑制轉(zhuǎn)座子活性和病毒感染。

實驗外包- siRNA應(yīng)用

RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和簡單性，所以是基因功能研究的重要工具。

大多數(shù)**屬于標(biāo)靶基因（或**基因）的抑制劑，因此RNAi 模擬了**的作用，這功能丟失（LOF)的研究方法比傳統(tǒng)的功能獲得（GOF)方法更具優(yōu)勢。因此, RNAi 在今天的制藥產(chǎn)業(yè)中是**靶標(biāo)確認(rèn)的一個重要工具。同時，那些在靶標(biāo)實驗中證明有效的siRNA/shRNA本身還可以被進(jìn)一步開發(fā)成為RNAi**。

在**標(biāo)靶發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)方面，RNAi技術(shù)已獲得了廣泛的應(yīng)用。生物技術(shù)公司或制藥公司通常利用建立好的RNAi文庫來引入細(xì)胞，然后通過觀察細(xì)胞的表型變化來發(fā)現(xiàn)具有功能的基因。如可通過RNAi文庫介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長來發(fā)現(xiàn)能抑制腫瘤的基因。一旦所發(fā)現(xiàn)的基因?qū)儆诳捎盟幍陌袠?biāo)（如表達(dá)的蛋白在細(xì)胞膜上或被分泌出細(xì)胞外），就可以針對此靶標(biāo)進(jìn)行大規(guī)模的**篩選。此外，被發(fā)現(xiàn)的靶標(biāo)還可用RNAi技術(shù)在細(xì)胞水平或動物體內(nèi)進(jìn)一步確認(rèn)。

在****方面，雙鏈小分子RNA或siRNA已被用于臨床測試用于幾種****，如老年視黃斑退化、肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肥胖癥等。在抗病毒**方面，帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)**已經(jīng)開始初步采用RNA干擾療法。腫瘤**方面也已經(jīng)取得了一些成果。

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