實(shí)驗(yàn)外包-流式細(xì)胞儀的使用程序
流式細(xì)胞儀是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置。它可以快速測(cè)量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細(xì)胞亞群從中分選出來(lái)。多數(shù)流式細(xì)胞計(jì)是一種零分辨率的儀器，它只能測(cè)量一個(gè)細(xì)胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標(biāo)，而不能鑒別和測(cè)出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說(shuō)，它的細(xì)節(jié)分辨率為零。
一．流式細(xì)胞儀開(kāi)機(jī)程序
1．檢查穩(wěn)壓器電源，打開(kāi)電源，穩(wěn)定5分鐘。
2．打開(kāi)儲(chǔ)液箱，倒掉廢液，并在廢液桶中加入400ml漂白水原液。打開(kāi)壓力閥，取出鞘液桶，將鞘液桶加至4/5滿（一般可用三蒸水，做分選必須用PBS或FACSFlow），合上壓力閥。確實(shí)蓋緊桶蓋，檢查所有管路是否妥善安置。
3．將FACSCalibur開(kāi)關(guān)打開(kāi)，此時(shí)儀器功能控制鈕的顯示應(yīng)是STANDBY，預(yù)熱5～10分鐘。排出過(guò)濾器內(nèi)的氣泡。
4．如果需要打印，打開(kāi)打印機(jī)電源。
5．打開(kāi)電腦，等待屏幕顯示出標(biāo)準(zhǔn)的蘋果標(biāo)志。
6．執(zhí)行儀器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的氣泡。
7．分析樣品時(shí)，先用FACAFlow或PBS進(jìn)行HIGHRUN約2分鐘。
做過(guò)分選后，每次開(kāi)機(jī)后需沖洗管道：向分選裝置上裝上兩個(gè)50ml離心管，不接通濃縮系統(tǒng)，摁下右下角白色按鈕開(kāi)始沖洗。待自動(dòng)停止后接通濃縮裝置，同上法沖洗一次。
二．流式細(xì)胞儀預(yù)設(shè)獲取模式文件（AcquisitionTemplateFiles）
1．從蘋果標(biāo)志中選擇CELLQuest見(jiàn)一個(gè)新視窗，可利用此視窗編輯一個(gè)獲取模式文件。
2．選取屏幕左列??圖工具中的Dotplot，繪出一個(gè)或多個(gè)DotPlots（點(diǎn)圖）。從DotPlot對(duì)話框中選取Acquisition作為圖形資料來(lái)源，并確定適當(dāng)?shù)?/span>x軸和y軸參數(shù)。
3．選取屏幕左列繪圖工具中的Histogram，同上法可繪出Histogram（直方圖）。
4．將此視窗命名后儲(chǔ)存于FACStationG3\BDApplications\CELLQuestFolder\EXP文件夾中，下次進(jìn)行相同實(shí)驗(yàn)時(shí)可直接調(diào)用。
本計(jì)算機(jī)中已設(shè)定兩個(gè)模式文件：ACQ和EXP，儲(chǔ)存于FACStationG3\BDApplications\CELLQuest\EXP文件夾中，ACQ用于細(xì)胞DNA檢測(cè)，EXP用于細(xì)胞表面標(biāo)志分析。
三．流式細(xì)胞儀用CELLQuest進(jìn)行儀器的設(shè)定和調(diào)整
1．從蘋果畫面中選取CELLQuest，進(jìn)入CELLQuest后在File指令欄中打開(kāi)合適的獲取模式文件。
2．從屏幕上方Acquire指令欄中，選取ConnecttoCytometer（快捷鍵：＋B）進(jìn)行電腦和儀器的連機(jī)。將出現(xiàn)的AcquisitonControl對(duì)話框移至合適位置。
3．從Cytometer指令欄中，開(kāi)啟Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四個(gè)對(duì)話框，并將它們移至屏幕右方，以便獲取數(shù)據(jù)時(shí)隨時(shí)調(diào)整獲取條件。也可以用+1，2，3，4獲得此四個(gè)對(duì)話框。
4．在Detectors/Amps對(duì)話框中，先為每個(gè)參數(shù)選擇適當(dāng)?shù)谋对瞿Ｊ剑?/span>amplifiermode）：線性模式Lin或?qū)?shù)模式Log。一般進(jìn)行細(xì)胞表面抗原分析如分析外周血的**細(xì)胞亞群時(shí)，FSC和SSC多以線性模式Lin測(cè)量，且DDMParam選擇FL2，而FL1，FL2與FL3則以對(duì)數(shù)模式Log測(cè)量；分析細(xì)胞DNA含量時(shí)，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin進(jìn)行測(cè)量，且DDMParam選擇FL2；分析血小板表型時(shí)，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Log進(jìn)行測(cè)量。
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