實(shí)驗(yàn)外包-HE染色的作用及意義
HE染色是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中*基本、使用*廣泛的技術(shù)方法.
TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),生成紅色的甲月贊,用來(lái)表示細(xì)胞的活力。配制多為2%,染色要避光,37度條件下,它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。
微生物染色的基本原理,是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等?;瘜W(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生地各種化學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附,且吸附作用穩(wěn)固;同樣,堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力,易于吸附。但是,要使酸性物質(zhì)染上酸性材料,必須把它們的物理形式加以改變(如改變pH值),才利于吸附作用的發(fā)生。相反,堿性物質(zhì)(如細(xì)胞質(zhì))通常僅能染上酸性染料,若把它們變?yōu)檫m宜的物理形式,也同樣能與堿性染料發(fā)生吸附作用。
**的等電點(diǎn)較低,pH值大約在2—5之間,故在中性、堿性或弱酸性溶液中,菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷;而堿性染料電離時(shí)染料離子帶陽(yáng)電。因此,帶陰電的**常和帶陽(yáng)電的堿性染料進(jìn)行結(jié)合。所以,在**學(xué)上常用堿性染料進(jìn)行染色。
由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后,細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán),如處理適宜,可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。
HE染色試劑
HE染色液(蘇木素、伊紅)
HE染色程序
細(xì)胞涂片后放入烤箱(溫度70度)烤干或用電吹風(fēng)吹干
細(xì)胞固定液(95%酒精配入3%的冰乙酸)固定30秒水洗
蘇木素 染色60~80秒
根據(jù)顏色深淺延長(zhǎng)或縮短時(shí)間
溫水返藍(lán)或流水沖洗 溫水30秒或流水沖洗60秒
85%酒精 10秒
伊紅 1-2秒
85%酒精 5秒 根據(jù)伊紅的顏色深淺控制時(shí)間
95%酒精
100%酒精 60秒
100%酒精 60秒
如用電吹風(fēng)吹干封片,可省略一缸無(wú)水酒精
中性樹(shù)膠封片
結(jié)果:脫落細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞漿呈紅色,對(duì)比分明
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