**組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為**熒光法、**酶法、**鐵蛋白法、**金法及放射**自顯影法等。

1、 標本的固定

    組織標本及時的取材和固定是做好**組化染色的關(guān)鍵**步，是有效防止組織自溶壞死，抗原丟失的開始。離體組織應(yīng)盡快的進行取材固定，*好20分鐘內(nèi)，因為有些抗原若固定不及時可能就檢測不到了。而對于固定液的選擇，原則上講，應(yīng)根據(jù)抗原的耐受性來選擇相應(yīng)的固定液，但在病理常規(guī)工作中很難做到這一點，因為病理的診斷和鑒別診斷都是在常規(guī)HE病理診斷的基礎(chǔ)上決定是否進行**組化的染色，而HE染色的常規(guī)組織處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛進行組織固定，利用其滲透性強，對組織的作用均勻進行固定。組織固定時間*好在6-24小時內(nèi)，一般組織固定時間不應(yīng)超過24小時，隨著固定時間的延長對組織抗原的檢出強度將逐漸降低。另外，非中性福爾馬林緩沖液、含酸和含汞固定液亦可導致標記失敗或減弱。

    2、 蠟塊的選擇

    正確選擇用于**組化的蠟塊也是確保染色質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。很多病例的組織蠟塊不止一個，不同的蠟塊中，組織成分常常并不完全一樣，一般選擇*具代表腫瘤特異性的蠟塊，*好含有內(nèi)對照。更值得注意的是，所選取的蠟塊除了要包含代表腫瘤特異性的組織外，應(yīng)盡量避免含有出血、壞死和脂肪組織。這些組織內(nèi)的抗原大多已被破壞或丟失，*終通常呈片狀彌漫染色，除影響制片的美觀外，容易導致誤判或誤診。而且這些組織通常影響切片的質(zhì)量。另外，*好不要選擇冰凍剩余組織或脫鈣組織，冰凍或脫鈣一般也會影響組織內(nèi)的抗原。

    3、 修復(fù)方法的選擇和對比

    抗原修復(fù)是指石蠟切片**組化染色前用酶、表面活性劑或微波、金屬鹽等對被掩蓋的抗原決定簇或變性的抗原進行暴露和修復(fù)，使抗原性得到一定程度的恢復(fù)過程。修復(fù)的方法有酶（胰酶、蛋白酶等）消化、加熱法（水浴、微波和高壓煮沸等）和超聲處理等，或者綜合利用以上方法。目前*常用的是加熱煮沸法，少數(shù)用酶消化法。大量實驗表明，固定時間越長的標本，所形成的交聯(lián)就越緊密，抗原就越難以被激活，所需的修復(fù)強度也就越強。各種修復(fù)方法染色強度的比較為：高壓法>水浴法>微波法。在日常工作中，要根據(jù)不同抗原的特性選擇合適的修復(fù)方法。抗原修復(fù)液常用的有枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）、EDTA緩沖液（pH 8.0～9.0）等。修復(fù)液的PH值對染色結(jié)果也會產(chǎn)生相當大的影響。研究發(fā)現(xiàn)在高PH值約pH8.0～9.0時，都有較好的染色結(jié)果，所以目前比較推崇的抗原修復(fù)液為高PH值的修復(fù)液，尤其是對核陽性的抗體。

    4、 確定陽性對照

**組化染色過程比較復(fù)雜、影響因素也很多，故應(yīng)設(shè)置陽性對照和陰性對照。尤其是陽性對照尤為重要。陽性對照包括兩種，一種為內(nèi)對照，這是一種比較理想的對照，對照和測試組織都在同一張切片中，都處于相同的實驗條件下，結(jié)果更可靠也更具有可比性。另一種稱為外對照，有時在測試的切片中不存在已知的抗原，如在胃的標本中懷疑是惡性黑色素瘤，在正常的胃組織中本身不存在相關(guān)的抗原，如果病變出現(xiàn)陽性反應(yīng)結(jié)果，尚能提示是惡黑，但是如果出現(xiàn)陰性結(jié)果，就無法確定是本身組織中不含黑色素瘤抗原，還是技術(shù)問題。因此，應(yīng)另外設(shè)立一個已知的陽性對照。另外，比較簡單的方法，是采用闌尾作為陽性對照。闌尾包含的組織種類較多，如有上皮、**組織、平滑肌、間質(zhì)、神經(jīng)、血管、間皮等。因此，一張闌尾切片可以檢測大多數(shù)常用的抗體。