**組化實(shí)驗(yàn)及用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為**組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或**細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù)。
下面介紹下**組化方法的具體實(shí)驗(yàn)流程步驟。
1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。
3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘
4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次。
5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。
6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜（*好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。
7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h.
8）PBS沖洗，3分鐘×5次。
9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h.10）PBS沖洗，3分鐘×5次。
11）顯色劑顯色（DAB等）。
12）自來水充分沖洗。
13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。
14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
**組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些？
1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤。不知抗體是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的工作液，怎么這么高稀釋度也沒能做出陽性結(jié)果。另外，不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索*佳濃度。
2、抗原修復(fù)不全，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn)，這是*佳的時(shí)間和次數(shù)。若不行，還可高壓修復(fù)。
3、組織切片本身這種抗原含量低。
4、血清封閉時(shí)間過長。
5、DAB孵育時(shí)間過短。
6、細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。
7、開始做**組化，建議大家一定要首先做個(gè)陽性對(duì)照片，排除抗體等外的方法問題。
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