三聚氰胺檢測試劑盒

使用前請仔細閱讀說明書

產(chǎn)地:美國abraxis

應用

本試劑盒適用于污染樣品中三聚氰胺的定量分析。

檢測原理

本試劑盒的原理為競爭ELISA。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行**測定。將三聚氰胺HRP標記物、標樣及樣品提取液加入包被三聚氰胺抗體的試驗孔中孵育。在30分鐘的孵育過程中，樣品中的三聚氰胺與HRP標記物競爭結合三聚氰胺抗體。孵育完后，傾去孔內(nèi)液體，洗滌除去未結合的三聚氰胺和HRP標記物。每孔加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質(zhì)。孵育20分鐘后終止反應，讀取各孔OD值。比較未知樣品的OD值與標樣的OD值，就可計算出樣品中的三聚氰胺濃度。

提供的試劑及材料

試劑盒在2-8oC貯存，于盒上標注日期前用完。

1． 用鋁箔袋真空包裝的96孔板 （12×8條），內(nèi)含指示干燥劑。

2． 濃度分別為 0, 20, 50,100和 500μg/L (ppb) 的4瓶三聚氰胺標準液。

3． 1 瓶 7mL 三聚氰胺HRP酶標記物.

4． 1 瓶 14 mL底物.

5． 1 瓶 14 mL停止液.  (注意! 1N 鹽酸. 勿接觸皮膚.)

注意事項

1． *好配套使用所提供的試劑，不要同其它公司的產(chǎn)品混用，不要將不同批次的產(chǎn)品混用。

2． 不按試驗步驟稀釋試劑或樣品將導致不準確的結果。

3． 不要使用過期的產(chǎn)品。

4． 使用之前將所有試劑恢復至室溫20-28⁰C，但不要放置超過24小時。

5． 三聚氰胺是有毒化學物質(zhì)，請小心處理。

6． 終止液是1N鹽酸，避免接觸皮膚和黏膜。萬一濺在皮膚上，立即用大量的水沖洗。

7． 與其它分析技術一樣（GC、HPLC），陽性結果應用另一種替代方法確認。

試劑盒未提供的材料

1.   蒸餾水或去離子水

2.   可吸取50ul的移液器及吸頭

3.   可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸頭

4.   吸水紙或相當?shù)奈牧?/span>

5.   帶450nm濾光片的酶標儀

6.   計時器

7.   洗瓶

8.   20mM PBS： 0.62gNaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl  蒸餾水定容至1000ml

試驗準備

I）潮飼料/濕貓糧的提取方法：稀釋系數(shù)：100

1）用攪拌機均質(zhì)樣品直至呈糊狀。

2）用10 mL 60% MeOH/水萃取2 g樣品并劇烈渦旋振蕩。

3）超聲裂解樣品1min。

4）再次渦旋振蕩樣品1min。靜置5min使其分層。

5）10 000rpm離心10min。

6）用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液。

7）用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

8）此稀釋的樣品可直接用于試驗。

回收率介于75-117%。

II）干飼料/貓糧的提取方法：稀釋系數(shù)：200

1）用攪拌機均質(zhì)干貓糧樣品。

2）稱取1 g均質(zhì)樣品，加10 mL 60% 甲醇/水。

3）劇烈渦旋振蕩后超聲裂解樣品1min。再次振蕩1min后靜置5min。

4）10 000rpm離心10min。

5）用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液。

6）用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

7）此稀釋的樣品可直接用于試驗。

檢測步驟  (注意: 標準及樣品*好做平行試驗以增加準確度.)

1.   將所有試劑及樣品置于室溫下，用實驗室級的水充滿洗瓶。

2.   從鋁箔袋中取出相應數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。

3.   吸取100ul標樣或稀釋的樣品提取液到相應的微孔。每個樣品使用一個新的吸頭。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶標記物。

4.   輕輕混合30秒，孵育30分鐘。

5.     孵育完后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用洗液完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復三次，總共洗板四次。

6.     在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。

7.     每孔加入100ul底物溶液。

8.     孵育20分鐘。

9.     每孔加入100ul終止液。

10.  用酶標儀讀取450nm下的吸光值。

結果分析

1.   半定量的結果可通過樣品吸光值與標樣吸光值的簡單對比而獲得:樣品的顏色比標樣的顏色淺則三聚氰胺的濃度比標樣的濃度高, 樣品的顏色比標樣的顏色深則三聚氰胺的濃度比標樣的濃度低。

2.   定量分析需要繪制以標樣吸光值為X軸,以標樣的濃度的log值為Y軸的曲線圖。畫一條穿過標樣點的直線，樣品的吸光值位于該直線上。樣品的吸光值在Y軸上的對應點為樣品的濃度。如果樣品吸光值大于*小標樣的吸光值，則樣品的濃度＜20 ppb；如果樣品吸光值小于*大標樣的吸光值，則樣品的濃度＞500 ppb。

檢測極限

預計本試劑盒的*小檢測極限為10ppb。

特異性

三聚氰胺檢測試劑盒與三嗪類似物的交叉反應可用*低檢測劑量（LLD，約為90%B/Bo）或用抑制50%的吸光值所需的劑量（50%B/Bo）表示。

化合物	LLD（ppb）	50%B/Bo (ppb)
三聚氰胺	10	400
三聚氰酸	40	＞10,000
三嗪	＞10,000	＞10,000
三嗪二銨	0.1	2

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