液相色譜測(cè)定保健食品中L－谷氨酰胺含量的方法
1 試劑
1.1乙腈色譜純。
1.2磷酸二氫鉀分析純。
1.3L－谷氨酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱量L－谷氨酰標(biāo)準(zhǔn)品0.050g，加入檢測(cè)用流動(dòng)相并定容至250mL。此溶液每mL含1mgL－谷氨酰胺。
2儀器設(shè)備
2.1高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器（UV）。
2.2超聲波清洗器。
2.3離心機(jī)。
3分析步驟
3.1樣品處理：準(zhǔn)確稱取一定量片劑粉末或膠囊內(nèi)容物于試管中，加入流動(dòng)相100mL，使?jié)舛葹槊亢辽写蠹s含L－谷氨酰胺10mg。超聲提取5min后以3000rpm/min離心3min。經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后待進(jìn)樣。
3.2液相色譜參考條件
3.2.1色譜柱：μ－BONDAPAKTMC184.6×250mm。
3.2.2柱溫：室溫。
3.2.3紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。
3.2.4流動(dòng)相：乙腈：水：磷酸二氫鉀=200mL：800mL：2g。
3.2.5流速：0.8mL/min。
3.2.6進(jìn)樣量：10μL。
3.2.7色譜分析：量取10μL標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。
4結(jié)果
4.1計(jì)算
式中：X－樣品中L－谷酰胺的含量，mg/g；
h1－樣品峰高或峰面積；
C－標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg/mL；
V－樣品定容體積，mL；
h2－標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高或峰面積。
m－試樣量，g。
4.2精密度和準(zhǔn)確度
對(duì)本方法進(jìn)行精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)，方法的回收率在96.6%~99.8%之間，相對(duì)相差≤3%。