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熒光顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)
熒光顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)
使用方法：
（1）將材料片放在載物臺(tái)上。
（2）開啟熒光顯微鏡穩(wěn)壓器．然后按下啟動(dòng)組點(diǎn)燃紫外燈15min內(nèi)不得關(guān)閉，關(guān)閉后3min內(nèi)不得再啟動(dòng)。
（3）將激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)至v，分色片調(diào)到v，選用495或475nm阻擋濾光片。
（4）選用uvFL40、uvFL100熒光接物鏡鏡檢。
（5）在玻片上加無熒光油，先用40 x，再用100 x調(diào)焦鏡檢．呈現(xiàn)熒光。
（7）因熒光物質(zhì)受紫外光照射時(shí)隨時(shí)間的增長熒光逐漸變?nèi)?，因此鏡檢時(shí)應(yīng)經(jīng)常變換視野。
（8）亦可用uvFL10或uvFL20低倍鏡鏡檢材料（用低倍鏡時(shí)不加無熒光油）。


熒光圖像的記錄方法：
  
熒光顯微鏡所看到的熒光圖像，一是具有形態(tài)學(xué)特征，二是具有熒光的顏色和亮度，在判斷結(jié)果時(shí)，必須將二者結(jié)合起來綜合判斷。結(jié)果記錄根據(jù)主觀指標(biāo)，即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察，基本上可靠的。隨著技術(shù)科學(xué)的發(fā)展，在不同程度上采用客觀指標(biāo)記錄判斷結(jié)果，如用細(xì)胞分光光度計(jì)，圖像分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結(jié)果，也必須結(jié)合主觀的判斷。
 
熒光顯微鏡攝影技術(shù)對(duì)于記錄熒光圖像十分必要，由于熒光很易褪色減弱，要即時(shí)攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24。以上。因紫外光對(duì)熒光猝滅作用大，如FITC的標(biāo)記物，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng)裝置。

注意事項(xiàng)：
（1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。
（2）應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。
（3）防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
（4）檢查時(shí)間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，*多不得超過2～3h。

（5）熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。**中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。

（6）標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。
（7）熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：一般分為四級(jí)，即“一”—無或可見微弱熒光。“+”—僅能見明確可見的熒光?！?+”—可見有明亮