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技術(shù)文章

色譜柱的清洗和再生方法
色譜柱的清洗和再生方法

除非特殊說明，在所有情況下，所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40-60倍。
應(yīng)在清洗過程開始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次柱效和容量因子等，比較色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。
確保色譜柱中沒有樣品和緩沖溶液，清洗前所用的溶劑應(yīng)與*初清洗時(shí)所用的溶劑相溶。
應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測(cè)試時(shí)所用的流動(dòng)相與色譜柱中*后的溶劑相溶。
1正相填料
用四氫呋喃沖洗。
用甲醇沖洗。
用四氫呋喃沖洗。
二氯甲烷沖洗。
用無苯正己烷沖洗。
2反相填料
用HPLC級(jí)水沖洗，沖洗時(shí)進(jìn)4等份的200μl的二甲亞砜（DMSO）。
用甲醇沖洗。
用氯仿沖洗。
用甲醇沖洗。
3陰離子交換填料
用HPLC級(jí)水沖洗。
用甲醇沖洗。
用氯仿沖洗。
4陽離子交換填料
用HPLC級(jí)水沖洗；在沖洗的過程中進(jìn)4等份200μl的DMSO
四氫呋喃沖洗。
5蛋白質(zhì)凝膠過濾填料
去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染物有兩種清洗/再生的方法。
弱保留蛋白質(zhì)
用30moL/L pH3.0磷酸鹽緩沖液沖洗。
強(qiáng)保留蛋白質(zhì)
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四種再生的方法，選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。
酸堿再生
適合于使用極性流動(dòng)相分析離子類分析物。
將色譜柱倒裝
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速?zèng)_冼。
用95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。
將色譜柱改為正向。