時(shí)間分辨熒光分析法(Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA)是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種微量分析方法,是目前*靈敏的微量分析技術(shù),其靈敏度高達(dá)10-19,較放射**分析(RIA)高出3個(gè)數(shù)量級(jí)。
時(shí)間分辨熒光分析法(TRFIA)實(shí)際上是在熒光分析(FIA)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,它是一種特殊的熒光分析。熒光分析的利用了熒光的波長(zhǎng)與其激發(fā)波長(zhǎng)的巨大差異克服了普通紫外-可見(jiàn)分光分析法中雜色光的影響,同時(shí),熒光分析與普通分光不同,光電接受器與激發(fā)光不在同一直線上,激發(fā)光不能直接到達(dá)光電接受器,從而大幅度的提高了光學(xué)分析的靈敏度。但是,當(dāng)進(jìn)行超微量分析的時(shí)候,激發(fā)光的雜散光的影響就顯得嚴(yán)重了。因此,解決激發(fā)光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。
解決雜散光影響的*好方法當(dāng)然是測(cè)量時(shí)沒(méi)有激發(fā)光的存在。但普通的熒光標(biāo)志物熒光壽命非常短,激發(fā)光消失,熒光也消失。不過(guò)有非常少的稀土金屬(Eu、Tb、Sm、Dy)的熒光壽命較長(zhǎng),可達(dá)1-2ms,能夠滿足測(cè)量要求,因此而產(chǎn)生了時(shí)間分辨熒光分析法,即使用長(zhǎng)效熒光標(biāo)記物,在關(guān)閉激發(fā)光后再測(cè)定熒光強(qiáng)度的分析方法。
TRFIA所用的標(biāo)記物是鑭系元素螯合物,利用這類熒光物質(zhì)熒光壽命長(zhǎng)及Stokes位移大的特點(diǎn),通過(guò)波長(zhǎng)和時(shí)間兩種分辨技術(shù),有效排除了非特異本底熒光的干擾,具有靈敏度高,標(biāo)記物制備簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性好,標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍寬,操作方便,成為*有發(fā)展前途的超微量分析技術(shù)和當(dāng)前標(biāo)記**分析發(fā)展到新階段的代表。
隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,對(duì)微量、超微量的測(cè)定會(huì)越來(lái)越多,同時(shí)RIA的污染問(wèn)題會(huì)越來(lái)越被重視,因此,時(shí)間分辨熒光分析法(TRFIA)具有越來(lái)越大的應(yīng)用空間。