大鼠雙氫睪酮(DHT)診斷試劑盒(酶聯(lián)**法)

(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

原理

采用酶聯(lián)**競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)血清中雙氫睪酮含量。首先用羊抗兔睪酮包被微孔板，制成固相一抗，然后加入待測(cè)血清、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記雙氫睪酮，使之形成包被抗雙氫睪酮抗體-雙氫睪酮（HRP）復(fù)合物，標(biāo)記雙氫睪酮的結(jié)合量與血清中的雙氫睪酮量成反比。經(jīng)顯色后在酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值(OD值)，通過(guò)計(jì)算機(jī)或作圖擬合濃度－吸光度曲線，反算出待測(cè)血清中雙氫睪酮含量。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。
2. 實(shí)驗(yàn)各組份試劑使用前充分搖勻。
3. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1. 加樣：每孔依次各加入標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)樣品100ul。
2. 每孔加入酶標(biāo)抗原25ul（空白孔除外），充分混勻，置37 ℃暗處反應(yīng)60分鐘。
3. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
4. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液混勻。
6. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 使用線性擬合功能，可選擇logit直線擬合方式。先將空白孔的吸光值設(shè)為本底（或稱非特異，空白）。校準(zhǔn)品S0到S5的濃度作為X，對(duì)應(yīng)的吸光值減本底后作為Y，選擇Logit擬合方式，擬合方程：ln(百分結(jié)合率/（1-百分結(jié)合率）)=BLog(濃度)+A，從擬合線上計(jì)算出待測(cè)血清的濃度。從擬合線上計(jì)算出待測(cè)血清的濃度。

檢驗(yàn)方法的局限性

溶血、乳糜血樣本響測(cè)定結(jié)果。

試劑盒性能

            1. 靈敏度：*小的DHT檢測(cè)濃度小于0.1ng/ ml。

2. 特異性：與其他**沒(méi)有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：變異系數(shù)均小于10％。

注意事項(xiàng)

            1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致**度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

            3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

            4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！