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實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)H1N1亞型豬流感病毒混勻儀技術(shù)文章

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點(diǎn)擊量： 212074 來(lái)源： 萊因特電子系統(tǒng)（上海）有限公司
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)H1N1亞型豬流感病毒混勻儀技術(shù)文章
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)H1N1亞型豬流感病毒混勻儀技術(shù)文章
根據(jù)GenBank中H1N1亞型豬流感病毒NP基因的序列(DQ889686),利用Premier express設(shè)計(jì)并合成1對(duì)引物和相應(yīng)的TaqMan探針,從豬流感病毒HN407株接種的雞胚尿囊液中提取總RNA,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增NP基因。將鑒定正確的NP基因片段克隆入pGEM-T Easy載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定后得到陽(yáng)性重組質(zhì)粒。以該陽(yáng)性重組質(zhì)粒為熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品模板建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。對(duì)探針濃度、引物濃度、鎂離子濃度和退火溫度進(jìn)行優(yōu)化,建立了*佳的熒光定量PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序。經(jīng)臨床應(yīng)用表明熒光定量PCR的建立為早期診斷豬流感病毒、定量分析豬流感病毒感染程度奠定了基礎(chǔ)。