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【養(yǎng)HL60細胞經(jīng)驗 ，分條表述】

• 1.細胞形態(tài)觀察。細胞膜是每天必須觀察的，看是否清晰，HL60細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的，早期的表現(xiàn)就是細胞膜某一點出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
• 2.HL60細胞往往會有“抱團”現(xiàn)象，抱團生長或死亡，個人認為應該勤換液或傳代，盡量避免細胞抱團。
• 3.HL60細胞生長迅速，強烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng)，用小瓶養(yǎng)的話，換液不及時，很容易死亡。HL60細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代，并且一般為一傳三，或一傳四。
• 4.培養(yǎng)液：1640培養(yǎng)液，1L一般加碳酸氫鈉2g，并加雙抗，胎牛血清濃度*佳為12%，*低不低于10%，HL60細胞對胎牛血清高度依賴。培養(yǎng)液PH應調為7.20-7.40之間。
• 5.防污染。HL60細胞生長迅速，較少發(fā)生污染，但常規(guī)措施應該做好。比如無菌操作，酒精**等，培養(yǎng)瓶口建議過火，包括瓶蓋，應過火4秒左右。
• 6.凍存。-20一小時，-80過夜，液氮長期保存。強烈建議液氮長期保存，盡量不要在-80長期保存，死亡率很高。
• 7.復蘇。調節(jié)水浴箱溫度為42℃，并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液溫度與室溫一致。1分鐘內(nèi)融化細胞(禁止搖晃凍存管)，移取至試管內(nèi)，動作要輕，從試管管底開始慢慢上提移液管，使細胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻，離心，洗2次。

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